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紫外分光光度計測BSA濃度曲線時注意事項
  • 發布日期:2017-03-21      瀏覽次數:4713
    •   BSA即為牛血清白蛋白,在生化實驗中有廣泛的應用。BSA濃度可根據紫外分光光度計由曲線測得,到底是怎么一回事呢?
        紫外分光光度計測量蛋白濃度常可用經典公式:
        蛋白的濃度(mg/ml)=1.4280-0.74A260;
        也可同時讀取一系列倍比稀釋的已知蛋白含量的標準液的光密度值,做出標準曲線,后換算出濃度。
        紫外分光光度計測試需注意的是:
        1.用于儀器調零的液體與待測樣品一致,標準蛋白也要使用同樣的溶液;
        2.光密度值應該在0.1-0.8之間;
        3.要求蛋白質溶液*透明;
        4.對含量很低的蛋白質溶液可使用215/225nm的波長測定;
        5.使用蛋白質濃度范圍為0.1-1.0mg/ml。
        配制濃度約為10mg/ml的BSA溶液,然后按一定倍數稀釋,至低濃度為0.017mg/ml,用紫外分光光度計測試這一系列的BSA溶液的吸光度,做出標準曲線。根據測量結果而知,用紫外分光光度計測試牛血清白蛋白(BSA)的濃度,濃度太高曲線將逐漸平緩,而在0.02-2.0mg/ml濃度之間,基本能呈現出較好的線性。
     
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