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紫外分光光度計如何避免吸光值漂移
  • 發布日期:2017-03-06      瀏覽次數:1449
    •   紫外分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。核酸的定量是紫外分光光度計使用頻率高的功能。
        紫外分光光度計讀數不穩定可能是用戶頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。事實上,分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即儀器有一定的準確度和度。
        ·核酸本身物化性質
        溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等,在測試時,離子濃度太高也會導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩定讀數。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下,才能得到的檢測結果。水的pH值不穩定,可能導致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內存在自身吸收,為了確保準確測量,請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
        ·樣品的稀釋濃度
        同樣是不可忽視的因素,由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值好在0.1-1.5 A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高(超過紫外分光光度計的測試范圍)。
        ·操作因素
        如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值;混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的小體積等多個操作事項。
     
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