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紫外分光光度計測DNA濃度的原理及步驟
  • 發布日期:2017-04-17      瀏覽次數:12422
    •   使用紫外分光光度計的原理可測的DNA的濃度與純度,它的原理是:
        核酸的大吸收波長為260nm,蛋白質為280nm,在波長260nm時,1OD值相當于雙鏈DNA濃度為50μg/ml,單鏈寡核苷酸的含量為30μg/ml,可以據此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280),估計核酸的純度。純凈DNA的比值為1.8,RNA為2.0。若比值高于1.8說明DNA樣品中的RNA尚未除盡,若樣品中含有酚和蛋白質將導致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干擾。紫外分光光度計只能用于測定濃度大于0.25μg/ml的核酸溶液,對濃度更小的樣品,可采用熒光分光光度法。
        具體操作步驟:
        1.紫外分光光度計先用水在260nm和280nm兩個波長下校零。
        2.取質粒DNA樣品2μl,用水稀釋100倍,轉入紫外分光光度計的石英比色杯中。
        3.在260nm和280nm分別讀出樣品光密度值。如果樣品濃度單位為μg/μl,則樣品DNA濃度為OD值的10倍。
        4.若OD<SUB>260</SUB>/OD<SUB>280</SUB>大于1.8,說明仍有RNA,可以考慮用RNA酶處理樣品,若小于1.8,說明樣品中含有蛋白質或酚,應再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀純化DNA。
     
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